玉溪市人民医院（以下简称“采购人”）按照《中华人民共和国政府采购法》和《政府采购非招标采购方式管理办法》等法律、法规的有关规定，于2021年1月20日（周三）15：00在玉溪市人民医院采购办公室会议室召开院内竞争性磋商采购会议。兹邀请符合相关资格条件、具有完成本项目能力的供应商（以下简称“投标人”）参加。

1、项目内容及预算:

1.1采购项目名称《yyzc2021002玉溪市人民医院科研服务院内竞争性磋商采购目录》

1.2 项目编号：yyzc2021002  预算金额156900元。

1.3付款方式：在磋商会议中,双方协商确定。

2、供应商资格条件：

2.1投标人须在中国境内注册，能在国内合法提供采购内容及其相应服务的企业，持有效的营业执照、组织机构代码证、税务登记证、法定代表人授权书、法定代表人身份证明书、最近一年内任意连续两个月以上依法缴纳税收凭证和社会保险费缴费凭证、产品用户名单及销售业绩材料、产品介绍彩页、信用记录信息截图（可通过“信用中国www.creditchina.gov.cn”、“中国政府采购网www.ccgp.gov.cn”等渠道查询，并将查询结果截图打印加盖鲜章），对列入行贿记录、失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单的供应商，拒绝参与本项目。

2.2 本次采购不接受联合体投标。

2.3 投标人须对所有品目做完整报价，不允许有漏项。

2.4为了方便采购人统计和比较，请各投标人按附件表格的顺序和样式进行报价，不要随意改动附件表格格式。

3、注意事项

3.1凡与本项目有关的通知，玉溪市人民医院将在 “玉溪市人民医院网”发布公告的形式送达所有与通知有关的潜在投标人，而不再用其他方式通知，请各投标人注意随时留意网站公告，因投标人不留意网站公告，导致项目废标的由投标人自负，采购人不予承担任何责任。

3.2 本采购项目无需提前报名，不用购买招标文件，也不必缴纳投标保证金和履约保证金。

3.3 采购会议开始时，投标人须提交针对本次采购会议的密封完好的标书（一正两副）。

3.4本次所采购项目都采用综合评分法评审（评分办法可电话索取）

4、采购单位基本情况

4.1 联系人及电话：陈老师  0877-2032103；

4.2 采购人地址：云南省玉溪市红塔区聂路21号。

玉溪市人民医院

2021年1月7日

附件1： 《yyzc2021002玉溪市人民医院科研服务院内竞争性磋商采购目录》

一包详细要求：

该标包，投标人需承诺完成以下工作，含检测费和试剂费及其它相关费用。

1.基因过表达及干扰病毒包装

2. 过表达及干扰后CCK8检测细胞增殖

细胞分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

3. 过表达及干扰后相关基因表达变化检测

细胞分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

检测10个基因表达变化：

4.免疫共沉淀检测蛋白间相互作用

分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

免疫共沉淀检测

5. 荧光素酶报告实验检测RNA调控关系检测

分组：

（1）miRNA过表达对照+靶基因结合位点野生型报告质粒

（2）miRNA过表达+靶基因结合位点野生型报告质粒

（3）miRNA过表达对照+靶基因结合位点突变型报告质粒

（4）miRNA过表达+靶基因结合位点突变型报告质粒

6.过表达及干扰后细胞功能检测

分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

建议按以下格式计算报价（仅供参考，如果投标人认为还有其它的费用或耗材，可在下表中增加，但总费用不得超过预算。）

二包详细要求：

一、大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养及鉴定

直接进行SD正常大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养及鉴定。

大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养：24小时内的新生 SD大鼠苯巴比妥（50mg /kg）腹腔注射麻醉后, 用大头针将四肢固定俯卧于泡沫手术台上, 用75%酒精消毒皮肤, 铺无菌手术巾。经背部正中切开皮肤, 钝性分离脊柱两旁肌肉, 充分暴露棘突和横突，从颈部椎管开口插入显微剪，交替在中线两侧将椎管平行剪开，用显微镊去除椎板暴露脊髓，解剖显微镜下可见两侧椎间孔内圆形透亮的脊神经节，显微镊轻轻推脊髓两侧以松动神经节，然后慢慢将脊髓从椎管中提出（神经节成串挂于脊髓两侧）转入装有5mLDF/12培养基的100mm培养皿中。在解剖显微镜下用镊子逐个分离摘取神经节，放入盛有4℃ DF-12培养基的培养皿中，眼科剪将神经节剪至0.5mm³大小的碎块，并用培养液冲洗3遍。将碎块移入加有0.25%胰蛋白酶+EDTA的离心管中，37℃培养箱中消化20min。吸出组织加入含有5% FS和5%马血清的DF-12培养基离心管中作用10min，终止胰蛋白酶的消化，然后将漂浮的絮状组织吸出，置入另一离心管，用含含有5%FS和5%马血清的DF-12培养基漂洗2次，最后加入含有5%FS和5%马血清的DF-12培养基，用吸管小心吹打，将其制成单细胞悬液，以106个/ml的密度接种于用多聚氨酸包被处理的24孔塑料细胞培养板中。于37℃、5%CO2培养箱中进行培养。

纯化培养：培养48h后大部分DRG已经贴壁, 全量换液并加入5μmol/L阿糖胞苷以抑制非神经元细胞的增殖， 96h后全量换液，此后每48h半量换液。

鉴定：

（1）倒置相差显微镜观察细胞形态，并白光拍照。

（2）制作细胞片片，免疫荧光检测NSE的分布情况（NSE：神经元特异性烯醇化酶）。

建议按以下格式计算报价（仅供参考）：

大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养：白光拍照3样：XX元/张×3样=XXX元

免疫荧光3样：XX元/样×3样=XXX元

荧光拍照3样：XX元/样×3样=XXX元

二、ET-1/TRPA1/SP信号通路在背根神经节神经元细胞中作用机制

实验分组：

①  背根神经节神经元细胞

②  背根神经节神经元细胞+ET-1

③  背根神经节神经元细胞+TRPA1抑制剂

④  背根神经节神经元细胞+ET-1+TRPA1抑制剂

取对数期期细胞，种于6孔板，进行上述干预。48h后性下述检测：

（1）   每组2重复，全细胞膜片钳检测细胞膜电位变化；

（2）   每组3重复，免疫荧光检测ET-1、TRPA1、SP的表达情况；

（3）   每组3重复，WB检测ET-1、TRPA1、SP的表达情况。

（4）   建议按以下格式计算报价（仅供参考）：

细胞培养：XXX元

膜片钳检测：XXX元/样×8孔=XXX元

免疫荧光：XX元/样×12样=XXX元

荧光拍照：XX元/样×12样=XXX元

WB：检测3个抗体，按M-1-2-3-4-1-2-3-4-1-2-3-4，每个抗体1张膜，共需3张膜，每张膜XXX元，共XXX元。

需要使用的试剂（下列信息仅供参考，中标人根据实际检测服务需要提供，直到项目完成）

NSE抗体          bs-1027R         bioss              50μl

ET-1抗体          bs-7346R         bioss              100μl

TRPA1抗体        ACC-037         Biocompare        若干

SP抗体            ab14184          abcam             50μl

TRPA1抑制剂      HY-N1500        MCE               5mg

内皮素1重组蛋白        LMAI Bio         若干